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1 简要介绍
菌种名 | Ar A4发根农杆菌 |
拉丁名 | Agrobacterium rhizogenes |
基因型 | Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type) |
代数 | 2代 |
运输形式 | 穿刺接种方式，固体培养基上生长 |
特征 | 发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染 大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。 |
保存 | 含30%甘油菌液放于-80度可长期保存 |
培养基 | TY培养基 |
2 使用方法
注意：由于培养基含氧对Ar A4菌种培养有显著影响，液体培养基培养Ar A4较慢，我们推荐采用固体培养基进行培养。
如果要制备菌悬液用于浸泡生根，也采用固体培养基进行培养，用液体培养基重悬固体培养基表面的菌种，然后调至合适的OD值去浸泡。
（1）TY（50μg/ml Kana）培养基配方： Tryptone 5g，Yeast extract 3g，补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌。配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌。每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。121℃ 20min灭菌后，待培养基温度至40℃以下，加入无菌抗生素至浓度为50μg/ml Kana。
（2）首次使用取100-200ul 涂布在 TY固体培养基培养皿上，28度培养3天。表面菌种长出后，用2-5ml的TY液体培养基重悬表面菌种，然后加入等体积50%甘油混匀，按照每管1mL的量分装至1.5 mL的EP管中，-80度保存。
（3）用接种环取（2）中的新鲜菌种，划线在TY固体培养基培养皿上，28度培养3天。表面菌种长出后，用2-5ml的TY液体培养基重悬表面菌种，然后加入等体积50%甘油混匀，按照每管1mL的量分装至1.5 mL的EP管中，-80度保存。
（4）我们推荐保存2代，视为安全保菌方式。
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