核苷酸胶体染料 SYBR Green I核酸染料
1 产品简介
高灵敏的DNA荧光染料。适用于各种电泳分析,操作简单,无须脱色或冲洗。至少可检出20 pg DNA,高于EB染色法25~100倍。与dsDNA 结合荧光信号会增强800~1000倍,0.1 ml Green-DNA Dye is sufficient for 20-25 minigels, as 1ul will prepare 10ml of agarose or PAGE gels.
2 储存条件
长期贮存置于-20℃。
3 使用方法
SYBR Green I 预染方法
◆ 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳
◆ 工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍,即为SYBR GreenⅠ工作液。SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
◆ 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
◆ 样品染色:向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
◆ DNA Marker染色:将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1μLSYBR GreenⅠ工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
◆ 上样、电泳:按常规操作。
SYBR Green I 后染方法
◆ 按照常规方法进行电泳。
◆ 用PH 7.0 - 8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000:1的比例稀释SYBR GreenⅠ浓缩液,混匀,制成染色溶液。
◆ 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10-30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的工作溶液轻轻地倒在胶板上,让工作液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
◆ 用蓝盾TM观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入蓝盾TM内观测。
4 使用注意事项
◆ 在”SYBR GreenⅠ预染色方法”中,电泳时间不要超过2小时,否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。
◆ 在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉。
◆ 如果想对用 SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入0.1- 0.3 的SDS。
◆ 在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 SYBR Green I 呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。
◆ SYBR Green 对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
效果图
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