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感受态细胞 KM71H 毕赤酵母PEG感受态细胞  电极杯 代替电转
 
   
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感受态细胞 KM71H 毕赤酵母PEG感受态细胞 电极杯 代替电转

  • 货  号:R09046
  • 品  牌:瑞楚生物REBIO
  • 销售价: ¥850.00
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1 产品介绍

    本试剂盒包括酵母感受态细胞、Solution 1Solution 2。其中酵母感受态细胞是用于转化的细胞,需-70度低温保存;Solution 1Solution2为转化时使用的试剂,均为无菌,需-20度保存,使用时解冻即可。本酵母感受态细胞采用专利技术制备的感受态,有别于传统山梨醇制备的感受态细胞,并配有Solution 1Solution 2,可直接用于热击法转化,而不需要使用电转仪和电击杯。本方法是电击法的替代方法,也避免了LiCl方法需要现制备感受细胞的繁琐。转化效率可以达到102-103cfu/ug线性化DNA,经本公司反复验证-80保存6个月不影响转化效率。

2 转化步骤

2.1 线性化质粒片段的制备

    取过夜培养的质粒菌种3ml,使用质粒抽提试剂盒抽提质粒,最后溶解于50ulTE或水中。将所有的质粒片段在200μl的体系中酶切线性化。用酚氯仿试剂去除蛋白并且浓缩片段至20ul体系中。多次制备且保证有大于50μg的质粒片段。

2.2 转化

2.2.1直接加于冻结的酵母细胞中以获得最大转化率; (注意加入至冻结的细胞中,而不是解冻的细胞中);

2.2.2. 加入后迅速放入37水浴孵育5min,中间混合样品12次;

2.2.3. 取出离心管,加入1.0ml Solution 1,彻底混匀;(注意可以弹或移液器轻轻混合,不可用移液器剧烈来回混合也不可用涡旋振荡器) 

2.2.4. 30水浴孵育1h

2.2.5. 室温下2000g离心10min,去除上清液,菌体沉淀重悬于0.8ml Solution 2中;

2.2.6. 离心样品,去除上清液,轻微操作将样品重悬于0.2ml Solution 2中;

2.2.7. 将所有转化液铺于选择性平板(例如MDZeocin抗性板,于30孵育34天后,鉴定;

 

 

 

 

3 注意事项

1. 转化步骤1DNA要加入至冻结的细胞中,注意不可解冻细胞后再加入DNA

2. 转化步骤2中混合样品是必需的;

3. 转化步骤3中要充分混匀,但不可剧烈混合;

4. 所有混合细胞均要轻柔;

5. 感受态的使用范围

   本公司感受态细胞有别于电转化, 转化效率不及电转化效率高,因此需要制备足量的DNA量。感受态细胞的用途也与相关文献报道有异。

X33感受态细胞

只适合于pPICA/B/CpPICαA/B/CZeocin筛选的质粒

GS115感受态细胞

只适合于pPIC3.5KpPIC9.0K等组氨酸缺陷性筛选的质粒

KM71H感受态细胞

只适合于pPIC3.5KpPIC9.0K等组氨酸缺陷性筛选的质粒

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